虾肝肠胞虫（EHP）核酸检测试剂盒（恒温荧光法）

SM-031121MⅢ-B02
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动物疫病检测系列
虾肝肠胞虫（
EHP）核酸检测试剂盒（一管式恒温荧光法
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产品说明
动物疫病检测系列基于独特的恒温荧光检测技术，可针对食品、动物组织等样品中 病原 的特异核酸
片段进行扩增 通过实时扩增曲线判定结果 。 本产品用于虾肝肠胞虫 EHP 的检测 检出限为 103copies/μl基因
组 DNA。
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产品组成（ 48 测试）
031121M
试剂 含量
A EHP I
22μL× 48管
B I
90μL × 1支
PG EHP I
50μL × 1支
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适用仪器
Dhelix C、 ESE Tube Scanner、 Genie II、 Deaou 308C等恒温荧光检测仪， ABI 7500 LightCycler480 CFX 96等荧光 PCR仪。
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自备耗材和仪器
①
灭菌 1.5mL或 2.0mL离心管 ② 冰盒 ③ 移液器 0.1 2.5μL 0.5 10μL 10 100μL 100 1000μL 及配套灭
菌吸头； ④ 离心机； ⑤ 涡旋混匀器； ⑥ 金属浴
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注意事项
1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
1）第一区：样本制备区。
2）第二区：模板添加区。
3）第三区：扩增及产物分析区。
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分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4．反应液中的成分对光敏感，应 避光保存 。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30秒。
5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
6．不同批号试剂请 勿混合使用 ，在有效期内使用。
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样品处理
参照相关标准处理样品，制备的样本保存待用。
详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
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实验操作
1. 模板制备（样本制备区）
建议使用配套水生动物病害基因组
DNA快速提取试剂盒系列产品。
2．添加模板（模板添加区，放置于冰盒中进行
取出所需测试数的已含有反应液
A EHP I的 PCR管，将试剂完全解冻， 离心 30秒，在管盖上标记管名（阴性
请
于 20 条件下 保存 有效期 12个月
SM-031121MⅢ-B02
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对照管
对照管NG、、样品样品XX、、阳性对照管阳性对照管PG）。）。打开管盖向各管管底分别加入打开管盖向各管管底分别加入1μL B--I，，盖上盖上阴性对照管管盖阴性对照管管盖，，其他其他各管各管分别沿管壁加入分别沿管壁加入2μL模板模板，，顺序为待测样品模板顺序为待测样品模板、、PG--EHP--I，，依次依次盖好盖好各管各管管盖管盖，，离心离心30秒秒，，立即进行扩增反应立即进行扩增反应。。
3. 扩增反应（扩增及产物分析区）扩增反应（扩增及产物分析区）
①
①恒温仪器恒温仪器63℃℃条件下反应条件下反应45 min。。待仪器升温至待仪器升温至63℃后，新建程序，设置实验名称及反应时间，将步骤℃后，新建程序，设置实验名称及反应时间，将步骤2中离心后的中离心后的PCR反应管放入恒温荧光分子检测仪，点击开始检测。反应管放入恒温荧光分子检测仪，点击开始检测。
②
②若使用荧光若使用荧光定量定量PCR仪，则荧光基团选择仪，则荧光基团选择FAM，淬灭基团选择，淬灭基团选择None，将，将63℃℃ 15 s，，63℃℃ 45 s作为一个循作为一个循环，于环，于63℃℃ 45 s处收集荧光信号，处收集荧光信号，45个循环。个循环。
若使用
若使用其他仪器请参照仪器说明书进行设置。其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
◆
◆ 结果判定结果判定
①
①恒温恒温仪器自动判定结果仪器自动判定结果，，若显示若显示“阳性阳性”，，则样品中含有虾肝肠胞虫则样品中含有虾肝肠胞虫（（EHP）；）；若显示若显示“阴性阴性”，，且没有出现且没有出现S型型扩增曲线，扩增曲线，则样品中不含有虾肝肠胞虫（则样品中不含有虾肝肠胞虫（EHP）或含量低于检测限。）或含量低于检测限。
②在荧光定量
②在荧光定量PCRPCR仪上，根据有无仪上，根据有无““SS”型扩增曲线判定结果。”型扩增曲线判定结果。若若有“有“SS”型扩增曲线，”型扩增曲线，则样品中含有虾肝肠胞则样品中含有虾肝肠胞虫（虫（EHP）；）；若无“若无“S”型扩增曲线，”型扩增曲线，则样品中不含有虾肝肠胞虫（则样品中不含有虾肝肠胞虫（EHP）或含量低于检测限。）或含量低于检测限。
★ NG反应管结果显示反应管结果显示“阴性阴性”，，PG反应管结果显示反应管结果显示“阳性阳性”，，此次检测结果有效此次检测结果有效，，否则无效否则无效。。如重复检测结果如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。仍为无效，请与技术支持人员联系。