急性肝胰腺坏死病（AHPND/EMS）病原核酸检测试剂盒（恒温荧光法）

SM-031151MⅢ-B02
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动物疫病检测系列
急性肝胰腺坏死病
(AHPND/EMS)病原 核酸检测试剂盒（一管式恒温荧光法）
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产品说明
动物疫病检测系列基于独特的恒温荧光检测技术，可针对食品、动物组织等样品中 病原 的特异核酸
片段进行扩增，通过实时扩增曲线判定结果。本产品用于 急性肝胰腺坏死病 (AHPND/EMS)病原 的检测， 检出限为
103copies/μl基因组 DNA。
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产品组成（ 48 测试）
031151M
试剂 含量
A-EMS-I
22μL× 48管
B-I
90μL × 1支
PG-EMS-I
50μL × 1支
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适用仪器
Dhelix-C、 ESE Tube Scanner、 Genie II、 Deaou-308C等恒温荧光检测仪， ABI 7500 LightCycler480 CFX 96等
荧光 PCR仪。
◆ 自备耗材和仪器
①
灭菌 1.5mL或 2.0mL离心管 ② 冰盒 ③ 移液器 0.1-2.5μL 0.5-10μL 10-100μL 100-1000μL 及配套灭
菌吸头； ④ 离心机； ⑤ 涡旋混匀器； ⑥ 金属浴
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注意事项
1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
1）第一区：样本制备区。
2）第二区：模板添加区。
3）第三区：扩增及产物分析区。
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分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4．反应液中的成分对光敏感，应 避光保存 。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30秒。
5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
6．不同批号试剂请 勿混合使用 ，在有效期内使用。
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样品处理
参照相关标准处理样品，制备的样本保存待用。
详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
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实验操作
1. 模板制备（样本制备区）
请参照
水生动物病害基因组 DNA快速提取试剂盒 说明书的提取步骤。
2．添加模板 模板添加区 ，放置于冰盒中进行
取出所需测试数的已含有反应液
A-EMS-I的 PCR管，将试剂完全解冻， 离心 30秒，在管盖上标记管名（阴性
请于 -20 条件下 保存 有效期 12个月
SM-031151MⅢ-B02
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对照管
对照管NG、、样品样品XX、、阳性对照管阳性对照管PG）。）。打开管盖向各管管底分别加入打开管盖向各管管底分别加入1μL B-I，，盖上盖上阴性对照管管盖阴性对照管管盖，，其他其他各管各管分别沿管壁加入分别沿管壁加入2μL模板模板，，顺序为待测样品模板顺序为待测样品模板、、PG-EMS-I，，依次依次盖好盖好各管各管管盖管盖，，离心离心30秒秒，，立即进行扩增反应立即进行扩增反应。。
3. 扩增反应（扩增及产物分析区）扩增反应（扩增及产物分析区）
①恒温仪器恒温仪器63℃℃条件下反应条件下反应45 min。。待仪器升温至待仪器升温至63℃后，新建程序，设置实验名称及反应时间，将步骤℃后，新建程序，设置实验名称及反应时间，将步骤2中中离心后的离心后的PCR反应管放入恒温荧光分子检测仪，点击开始检测。反应管放入恒温荧光分子检测仪，点击开始检测。

②若使用荧光定量若使用荧光定量PCR仪，则荧光基团选择仪，则荧光基团选择FAM，淬灭基团选择，淬灭基团选择None，将，将63℃℃ 15 s，，63℃℃ 45 s作为一个作为一个循环，于循环，于63℃℃ 45 s处收集荧光信号，处收集荧光信号，45个循环。个循环。
若使用
若使用其他仪器请参照仪器说明书进行设置。其他仪器请参照仪器说明书进行设置。
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◆ 结果判定结果判定
①恒温恒温仪器自动判定结果仪器自动判定结果，，若显示若显示“阳性阳性”，，则样品中含有则样品中含有急性肝胰腺坏死病急性肝胰腺坏死病(AHPND/EMS)病原病原；；若显示若显示“阴性阴性”，，且没有出现且没有出现S型扩增曲线，型扩增曲线，则样品中不含有则样品中不含有急性肝胰腺坏死病急性肝胰腺坏死病(AHPND/EMS)病原病原或含量低于检测限。或含量低于检测限。

②在荧光定量在荧光定量PCR仪上仪上，，根据有无根据有无“S”型扩增曲线判定结果型扩增曲线判定结果。。若若有有“S”型扩增曲线型扩增曲线，，则样品中含有则样品中含有急性肝胰腺坏急性肝胰腺坏死病死病(AHPND/EMS)病原病原；；若无若无“S”型扩增曲线型扩增曲线，，则样品中不含有则样品中不含有急性肝胰腺坏死病急性肝胰腺坏死病(AHPND/EMS)病原病原或含量低于检或含量低于检测限。测限。
★ NG反应管结果显示反应管结果显示“阴性阴性”，，PG反应管结果显示反应管结果显示“阳性阳性”，，此次检测结果有效此次检测结果有效，，否则无效否则无效。。如重复检测结果如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。仍为无效，请与技术支持人员联系。