零背景 pTOPO- 通用克隆试剂盒

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本制品和传统的 T4 连接酶原理不同，它利用了 Topoisomerase 可以在瞬间（几秒钟 - 几分钟）、高效（接近 100%）连接 DNA 片段的原理采用本公司特殊的工艺制成。 1. 可以在瞬间（几秒钟 - 几分钟）完成任意 PCR 产物（兼容 A 末端 / 平末端）连接。 2. 特制的新型载体质粒大小仅仅不到 2kb，充分发挥了 TOPO 载体越小，可容纳片段越大的优势，最大限度提高了大片段连接效率；连接后质粒大小比传统载体小 2kb 以上，质粒越小，转化效率越高，极大的提高了各种片段连接后的转化子数量。 3. 采用氨苄抗性载体只需 10 分钟复苏时间，比卡那抗性载体 1 小时复苏时间缩短 6 倍。 4. 最快可以不用冰浴和热休克，室温 5 分钟内完成转化；无需 1 小时复苏，只需 37℃ 10 分钟复苏便可以涂板。从连接到涂板最快只需 15-20 分钟。 5. 自杀基因零背景原理，无自连假阳性，无需繁琐蓝白斑筛选和菌落 PCR 筛选。大部分情况下随机挑一个克隆便是有插入的（接近 100%）。 6. 连接长片段能力远超传统 TA/Blunt 克隆载体，可连接长达 10kb 片段（例如连接 5kb 片段，也可能达到挑 10 个菌落，至少 8 个是有插入的效果），是新一代世界领先的简单、快速、零背景免筛选的 TOPO TA/Blunt 克隆载体。

本制品在克隆插入位点两侧不含多克隆酶切位点（Simple），需要时可在 PCR 扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用 PCR 扩增引物导入的酶切位点进行酶切时，酶切反应将不会受到载体上其它多克隆酶切位点影响，可大大提高酶切效率，增加亚克隆成功率。注意：测序只能采用 M13F/M13R 通用引物测序（见后面图谱），但是不能采用 M13(-47)/ M13(-48) 通用引物测序。菌落 PCR 可使用和测序相同的引物。