第二代高效耐热反转录酶是在鼠源病毒反转录酶基础上进行定点突变改良而得。经过突变文库
筛选,使得其热稳定性更强,可耐受 65℃高温反应,可以避免普通的 M-MuLV 反转录酶 (RNase
H-) 在 37℃反应时的一些不足。第二代高效耐热反转录酶具有灵敏度高、特异性高、合成能力高
( 较多的全长 cDNA),热稳定性好和半衰期长的特点。相比于低温条件下反转录反应,采用高温反
转录可显著打开 RNA 二级结构,从而提高复杂 RNA 模板的扩增性能、提高反转录 cDNA 的长度
和产量,从而提高后续检测的灵敏度。高温反转录对于高 GC 含量 RNA 的反转录,能有效减少二
级结构,提升反转录效率。该酶去除了 RNase H 活性,不能够选择性剪切 RNA 和 DNA 杂合双链
中的 RNA,从而避免反转录过程中降解 RNA。在通读 GC 含量高,二级结构复杂的 RNA 模板和
反转录长片段 cDNA 等方面的表现突出。精心优化的反应 Buffer 使逆转录酶应用范围更广,对后
续的 PCR 以及定量 PCR 实验兼容性高。合成的 cDNA 第一条链后续可以用于 PCR、real-time
PCR、cDNA 第二条链的合成等。也可以用于 DNA 探针的标记,通过引物延伸来分析 RNA,以及
用于基因芯片荧光探针的标记。
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