人间充质干细胞成脂分化试剂盒

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人间充质干细胞成脂分化试剂盒

产品基本信息

产品名称	Applied Cell® 人间充质干细胞成脂分化试剂盒
货号	AC-1001029
规格	基础培养基90mL，添加剂10mL
保存条件	基础培养基 2-8℃，添加剂-20--80℃保存；混合后 2-8℃保存，2-3 周内使用完毕
使用范围	人间充质干细胞诱导分化成脂
保质期	12个月

产品简介

人间充质干细胞成脂分化试剂盒是埃泽思生物（Applied Cell®）自主研发的一款用于人间充质干细
胞分化成脂的试剂盒，可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的成脂分化。本产品仅限于科
学研究，不能用于临床诊断、治疗，以及其他用途。

产品内容

试剂	规格	数量	运输
人间充质干细胞成脂分化基础培养基	90mL	1 瓶	冰袋
人间充质干细胞成脂分化添加剂	10mL	1 瓶	干冰

产品特性
 诱导分化程序简单便捷。
 诱导成脂细胞效率高。
操作方法
1. 相关材料
• Xeno-Free 人间充质干细胞培养基（Applied Cell®:AC-1001003）
• 人间充质干细胞成脂分化试剂盒（Applied Cell®:AC-1001029）
• 成脂检测染液（Applied Cell®:AC-1001022）
• 细胞消化液（Applied Cell®:AC-1001024）
• 磷酸盐缓冲液(1×) （Applied Cell®: Cat.AC-1001037）

实验准备
人间充质干细胞成脂分化培养基的配制
2.1. 在 2-8℃解冻人间充质干细胞成脂分化添加剂，轻晃摇匀；
2.2. 随后将添加剂加入到人间充质干细胞成脂分化基础培养基中（10ml 添加剂与 90mL 基础培养
基彻底混合）混匀，即为人间充质干细胞成脂分化培养基。人间充质干细胞成脂分化培养基可在2-8℃稳定储放 2 周。
注意：人间充质干细胞脂肪维持添加剂只能在 2-8℃解冻，待添加剂加入到培养基以后，请用培
养基润洗添加剂瓶 1-2 次，因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。
实验操作
诱导成脂（以 6 孔板为例）

3.1. 将传代或复苏冻存的人间充质干细胞接种到 6 孔板上，密度为 2×105 -3×105 cells/cm2 或 2×
105 -3×105 cells/孔，置于 37℃，5% CO2 培养箱中培养；
3.2. 当人间充质干细胞融合度达到 80-90%时，开始诱导脂肪前体细胞分化。吸掉 Xeno-Free 人间
充质干细胞培养基，每孔加 1ml 预热 PBS 清洗一次，吸掉 PBS，加入 2 ml 人间充质干细胞成脂分化培养基，以此记为第 0 天；
注意：人间充质干细胞成脂分化培养基使用前需预热至 37℃。
3.3. 每 1-2 天更换人间充质干细胞成脂分化培养基；
3.4. 第 5-6 天可以看到少量脂滴；
3.5. 第 9-14 天待脂肪滴颗粒成熟即可进行拍照，染色。（根据情况诱导时间可适当延长）
注意：①培养基每 1-2 天换液。由于随着脂肪细胞的成熟，pH 的降低会观察到培养基变黄。
pH 从 7 降到 6.5，细胞增殖会变慢。pH 在 6.5 到 6 时，细胞活力会降低。所以诱导后期，需要每天换液。
②换液时尽量不使培养基变干，培养基变干会降低细胞层对培养皿表面的粘附。
③细胞分化效果和供体有关。供体的年龄是一个因素。有研究发现与年长者相比，年轻供体来源的细胞的分化能力更强。

图 1 间充质干细胞在成脂分化 1 天（A）、5 天（B）、13 天(C)时

的细胞照片，可以观察到成簇的脂滴（200×）

成脂检测染液染色

4.1. 每 6ml 成脂染液加入 4ml 蒸馏水制成染色工作液，混匀室温放置 5-10 分钟。加入蒸馏水后，染
液会有片状结晶析出，可用直接使用或滤网过滤除掉结晶。
4.2. 脂肪诱导分化结束后，吸掉原有培养基，用 1×PBS 冲洗 1-2 次。每孔加入适量细胞固定液，固定 20 min。
4.3. 吸掉细胞固定液，用 1×PBS 冲洗 2 次。，加入适量染色工作液，使染液完全覆盖脂肪滴，室温染色 15min。
4.4. 吸掉染色工作液，用 1×PBS 冲洗 2-3 次。
4.5. 将培养板置于显微镜下观察脂滴染色效果，拍照。
注意：染色后显微镜观察，及时拍照。如果时间过长，脂肪滴会发生破裂。