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上海埃泽思生物科技有限公司
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人间充质干细胞成脂分化试剂盒(上海埃泽思)

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价格

¥1518.00元/套

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人间充质干细胞成脂分化试剂盒

产品基本信息

产品名称
Applied Cell® 人间充质干细胞成脂分化试剂盒
货 号
AC-1001029
规 格
基础培养基90mL,添加剂10mL
保存条件
基础培养基 2-8℃,添加剂-20--80℃保存;
混合后 2-8℃保存,2-3 周内使用完毕
使用范围
人间充质干细胞诱导分化成脂
保质期
12个月
产品简介

人间充质干细胞成脂分化试剂盒是埃泽思生物(Applied Cell®)自主研发的一款用于人间充质干细
胞分化成脂的试剂盒,可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的成脂分化。本产品仅限于科
学研究,不能用于临床诊断、治疗,以及其他用途。

产品内容

试剂
规格
数量
运输
人间充质干细胞成脂分化基础培养基
90mL
1 瓶
冰袋
人间充质干细胞成脂分化添加剂
10mL
1 瓶
干冰
产品特性
 诱导分化程序简单便捷。
 诱导成脂细胞效率高。
操作方法
1. 相关材料
• Xeno-Free 人间充质干细胞培养基(Applied Cell®:AC-1001003)
• 人间充质干细胞成脂分化试剂盒(Applied Cell®:AC-1001029)
• 成脂检测染液(Applied Cell®:AC-1001022)
• 细胞消化液(Applied Cell®:AC-1001024)
• 磷酸盐缓冲液(1×) (Applied Cell®: Cat.AC-1001037)

实验准备
人间充质干细胞成脂分化培养基的配制

2.1. 在 2-8℃解冻人间充质干细胞成脂分化添加剂,轻晃摇匀;
2.2. 随后将添加剂加入到人间充质干细胞成脂分化基础培养基中(10ml 添加剂与 90mL 基础培养
基彻底混合)混匀,即为人间充质干细胞成脂分化培养基。人间充质干细胞成脂分化培养基可在2-8℃稳定储放 2 周。
注意:人间充质干细胞脂肪维持添加剂只能在 2-8℃解冻,待添加剂加入到培养基以后,请用培
养基润洗添加剂瓶 1-2 次,因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。
实验操作
诱导成脂(以 6 孔板为例)

3.1. 将传代或复苏冻存的人间充质干细胞接种到 6 孔板上,密度为 2×105 -3×105 cells/cm2 或 2×
105 -3×105 cells/孔,置于 37℃,5% CO2 培养箱中培养;
3.2. 当人间充质干细胞融合度达到 80-90%时,开始诱导脂肪前体细胞分化。吸掉 Xeno-Free 人间
充质干细胞培养基,每孔加 1ml 预热 PBS 清洗一次,吸掉 PBS,加入 2 ml 人间充质干细胞成脂分化培养基,以此记为第 0 天;
注意:人间充质干细胞成脂分化培养基使用前需预热至 37℃。
3.3. 每 1-2 天更换人间充质干细胞成脂分化培养基;
3.4. 第 5-6 天可以看到少量脂滴;
3.5. 第 9-14 天待脂肪滴颗粒成熟即可进行拍照,染色。(根据情况诱导时间可适当延长)
注意:①培养基每 1-2 天换液。由于随着脂肪细胞的成熟,pH 的降低会观察到培养基变黄。
pH 从 7 降到 6.5,细胞增殖会变慢。pH 在 6.5 到 6 时,细胞活力会降低。所以诱导后期,需要每天换液。
②换液时尽量不使培养基变干,培养基变干会降低细胞层对培养皿表面的粘附。
③细胞分化效果和供体有关。供体的年龄是一个因素。有研究发现与年长者相比,年轻供体来源的细胞的分化能力更强。

图 1 间充质干细胞在成脂分化 1 天(A)、5 天(B)、13 天(C)时

的细胞照片,可以观察到成簇的脂滴(200×)

成脂检测染液染色

4.1. 每 6ml 成脂染液加入 4ml 蒸馏水制成染色工作液,混匀室温放置 5-10 分钟。加入蒸馏水后,染
液会有片状结晶析出,可用直接使用或滤网过滤除掉结晶。
4.2. 脂肪诱导分化结束后,吸掉原有培养基,用 1×PBS 冲洗 1-2 次。每孔加入适量细胞固定液, 固定 20 min。
4.3. 吸掉细胞固定液,用 1×PBS 冲洗 2 次。,加入适量染色工作液,使染液完全覆盖脂肪滴,室温染色 15min。
4.4. 吸掉染色工作液,用 1×PBS 冲洗 2-3 次。
4.5. 将培养板置于显微镜下观察脂滴染色效果,拍照。
注意:染色后显微镜观察,及时拍照。如果时间过长,脂肪滴会发生破裂。

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