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上海埃泽思生物科技有限公司
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牛血清白蛋白检测试剂盒(上海埃泽思)

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¥3800.00元/个

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牛血清白蛋白检测试剂盒 

产品基本信息

产品名称 
Applied Cell® 牛血清白蛋白检测试剂盒
货 号
AC-1001070
规 格
48T
保存条件
未开封试剂盒,4℃保存;已开封,标准品-20℃保存,
酶标板加干燥剂后密封-20℃保存,其他 4℃保存
使用范围
用于测定血清,血浆及相关液体等样本
保质期 
6个月
产品简介

牛血清白蛋白检测试剂盒是埃泽思生物(Applied Cell®)自主研发的一款用于该试剂盒采用“一步”

夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)体外定量检测血清、血浆、组织、细胞或其他相关生物液体中 BSA 浓度。

产品特性

⚫ 检测范围:1.5ug/mL -48ug/mL
⚫ 灵敏性:0.1ug/mL
⚫ 特异性:可检测样本中的 BSA , 且与其它类似物无明显交叉反应。
⚫ 重复性:板内,板间变异系数均<10%。

产品内容

试剂
规格 
运输
牛血清白蛋白检测试剂盒
48T
冰袋
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试剂盒内容

实验准备
所需自备物品 
450nm 滤光片酶标仪(建议仪器使用前预热);高精度枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL;
移液器;灭菌注射水;吸水纸;37℃恒温箱;
试剂准备

8.1 使用前将试剂盒和标本缓慢均衡至室温(18-25℃)。
8.2 标准品(冻干品):试剂盒提供了已知浓度的 6 支标准品:

样本的正常浓度值在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取 50μL 样本上样即可。当有部分样
本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
8.3 从试剂盒中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象;放置室温,轻摇均匀,待结晶完全溶解后
再配置洗涤液。可将 25ml 浓缩洗涤液用灭菌注射水稀释配置成 500ml 工作浓度的洗涤液,未用完的放回
4℃(48T 配制成 300ml 备用)。

8.4 20×洗涤缓冲液的稀释:按 1:20 稀释,即 1 份 20×洗涤缓冲液加 19 份灭菌注射水。
注:标准品使用时要轻轻充分混匀,避免气泡为保证实验结果的准确请使用微量吸管,并校准微量加液器。

8.5 每一次实验,均需重新测定标准曲线。

试剂准备注意事项

1. 试验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时,请按国
家生物试验室安全防护条例执行。
2. 刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。暂时
不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋,按照上述表格中保存条件存放。
3. 检测使用的酶标仪需要安装能检测 450±10nm 波长的滤光片。
4. 不同批号的试剂盒组份不能混用(反应终止液除外)。

5. 试验中所用的 EP 管和吸头均为一次性使用,严禁混用。

样品收集方法


9.1 血清:全血样品于室温放置 2 小时或 2-8℃过夜后于 1000×g 离心 20 分钟,取上清即可检测,收
集血液的试管应为一次性的无菌,无热源试管。

9.2. 血浆:抗凝剂推荐使用 EDTA 钠盐,样品采集后 30 分钟内于 1000×g 离心 15 分钟,取上清即可检测。

避免使用溶血,高血脂样品。

9.3. 组织匀浆:用预冷的 PBS (0.01 M, PH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎。将
剪碎的组织与对应体积的 PBS(一般按 1: 9 的重量体积比,在 PBS 中需加入蛋白酶抑制剂)加入
玻璃匀浆器中, 在冰上充分研磨。 为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎或反
复冻融。最后将匀浆液 5000×g 离心 5-10 分钟,取上清检测。
9.4. 细胞提取液:贴壁细胞用冷的 PBS 轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g 离心 5 分钟后收集
细胞;悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的 PBS 洗涤 3 次。每 1×106个细胞中加入 200
μL PBS 重悬并通过反复冻融使细胞破碎(若含量很低可减少 PBS 的体积)。将提取液 1500×g 离心 10 分钟,取上清检测。
9.5. 细胞培养上清或其他生物体液:1000×g 离心 20 分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

样品收集注意事项

1. 样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于 2-8℃,若不能及时检测, 请按一次使用量分装,冻
存于-20℃(1 个月内检测),或-80℃(3 个月内检测),避免反复冻融。
2. 试剂盒检测范围不等同于样本的浓度范围,如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值,需根据
实际情况,做适当倍数稀释(建议查阅文献后先做预实验,以确定稀释倍数)。
3. 若所检样本不在说明书所列样本之中,建议做预实验验证其检测有效性。

4. 使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液, 因引入某些化学物质会导致 ELISA 测值出现偏差。
5. 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

实验操作
注:根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔,每个样
品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

11.1 试剂盒室温平衡 30min,然后从铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回 4℃;
11.2 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL;
11.3 样本孔中加入待测样本 50μL,空白孔不加;
11.4 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体 100μL,
用封板摸封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育 60min;
11.5 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上
拍干,如此重复洗板 5 次(也可用洗板机洗板);
11.6 每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min;
11.7 每孔加入终止液 50μL,15min 内,在 450nm 波长处测定各孔的 O.D 值;
实验操作注意事项
1.准备: 准备一次实验所需要的酶标条,其他的可从微孔板上拆下,密封,按照 说明书要求保存,以备下次使用;
2.加样:实验操作中需使用一次性吸头,避免交叉污染。加样时不要有气泡, 将样品加于酶标板底
部, 尽量不触及孔壁, 轻轻晃动混匀, 加样或加试剂时,第一个孔与最后一个孔加样之间的时
间间隔如果太大,会导致不同的反应时间,影响到测量值的准确性及重复性。因此, 一次加样时
间(包括标准品及所以样品)最好控制在 5 分钟内;
3.温育: 为防止样品蒸发,实验时请将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内,以避免液体蒸发,洗板
后应尽快进行下一步操作,避免酶标板处于干燥状态,同时应严格遵守温育时间和温度;
4.洗涤: 充分的洗涤非常重要,在每次洗涤过程中,都要将洗涤液完全甩干。洗涤过程中反应孔中
残留的洗涤液应在滤纸上空干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要保证板底不应有残留液体、
指印及污渍等,避免影响酶标仪读数;
5.反应时间的控制: 加入显色液后需定时观察反应孔的颜色变化,如颜色较深,请提前加入终止液
终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数;
6.底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。

结果分析

推荐使用专业制作曲线软件进行分析, 如 curve expert 1.30, 根据样品 O.D.值,由标准曲线查
出相应的浓度,再乘以相应稀释倍数(没有稀释不需要乘),即为样品实际浓度。各标准品及样本
O.D.值扣除空白孔 O.D.值后作图(5 点图),如设重复孔,则应取其平均值计算。以标准品的浓度
为纵坐标(或对数坐标),O.D.值为横坐标(或对数坐标),绘出标准曲线(最佳方程式应依回归
方程计算的 R2 值来定,以 R2 值越趋近于 1 为好)。

警告
本试剂盒中终止液具有轻微腐蚀性,使用时应避免接触衣物或眼、手等皮肤暴露部位。


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