牛血清白蛋白检测试剂盒

牛血清白蛋白检测试剂盒 

产品基本信息

产品名称	Applied Cell® 牛血清白蛋白检测试剂盒
货 号	AC-1001070
规 格	48T
保存条件	未开封试剂盒，4℃保存；已开封，标准品-20℃保存， 酶标板加干燥剂后密封-20℃保存，其他 4℃保存
使用范围	用于测定血清，血浆及相关液体等样本
保质期	6个月

产品简介

牛血清白蛋白检测试剂盒是埃泽思生物（Applied Cell®）自主研发的一款用于该试剂盒采用“一步”

夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）体外定量检测血清、血浆、组织、细胞或其他相关生物液体中 BSA 浓度。

产品特性

⚫ 检测范围：1.5ug/mL -48ug/mL
⚫ 灵敏性：0.1ug/mL
⚫ 特异性：可检测样本中的 BSA , 且与其它类似物无明显交叉反应。
⚫ 重复性：板内，板间变异系数均<10%。

产品内容

试剂	规格	运输
牛血清白蛋白检测试剂盒	48T	冰袋

相关材料

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试剂盒内容

实验准备
所需自备物品 
450nm 滤光片酶标仪（建议仪器使用前预热）；高精度枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL；
移液器；灭菌注射水；吸水纸；37℃恒温箱；
试剂准备

8.1 使用前将试剂盒和标本缓慢均衡至室温(18-25℃)。
8.2 标准品（冻干品）：试剂盒提供了已知浓度的 6 支标准品:

样本的正常浓度值在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取 50μL 样本上样即可。当有部分样
本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
8.3 从试剂盒中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象；放置室温，轻摇均匀，待结晶完全溶解后
再配置洗涤液。可将 25ml 浓缩洗涤液用灭菌注射水稀释配置成 500ml 工作浓度的洗涤液，未用完的放回
4℃（48T 配制成 300ml 备用）。

8.4 20×洗涤缓冲液的稀释：按 1：20 稀释，即 1 份 20×洗涤缓冲液加 19 份灭菌注射水。
注：标准品使用时要轻轻充分混匀，避免气泡为保证实验结果的准确请使用微量吸管，并校准微量加液器。

8.5 每一次实验，均需重新测定标准曲线。

试剂准备注意事项

1. 试验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国
家生物试验室安全防护条例执行。
2. 刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时
不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按照上述表格中保存条件存放。
3. 检测使用的酶标仪需要安装能检测 450±10nm 波长的滤光片。
4. 不同批号的试剂盒组份不能混用(反应终止液除外)。

5. 试验中所用的 EP 管和吸头均为一次性使用，严禁混用。

样品收集方法

9.1 血清：全血样品于室温放置 2 小时或 2-8℃过夜后于 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测，收
集血液的试管应为一次性的无菌，无热源试管。

9.2. 血浆：抗凝剂推荐使用 EDTA 钠盐，样品采集后 30 分钟内于 1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。

避免使用溶血，高血脂样品。

9.3. 组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01 M, PH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将
剪碎的组织与对应体积的 PBS(一般按 1: 9 的重量体积比，在 PBS 中需加入蛋白酶抑制剂)加入
玻璃匀浆器中， 在冰上充分研磨。 为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎或反
复冻融。最后将匀浆液 5000×g 离心 5-10 分钟，取上清检测。
9.4. 细胞提取液：贴壁细胞用冷的 PBS 轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g 离心 5 分钟后收集
细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的 PBS 洗涤 3 次。每 1×106个细胞中加入 200
μL PBS 重悬并通过反复冻融使细胞破碎(若含量很低可减少 PBS 的体积)。将提取液 1500×g 离心 10 分钟，取上清检测。
9.5. 细胞培养上清或其他生物体液：1000×g 离心 20 分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

样品收集注意事项

1. 样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于 2-8℃，若不能及时检测， 请按一次使用量分装，冻
存于-20℃(1 个月内检测)，或-80℃(3 个月内检测)，避免反复冻融。
2. 试剂盒检测范围不等同于样本的浓度范围，如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，需根据
实际情况，做适当倍数稀释(建议查阅文献后先做预实验，以确定稀释倍数)。
3. 若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。

4. 使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液, 因引入某些化学物质会导致 ELISA 测值出现偏差。
5. 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

实验操作
注：根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔，每个样
品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

1.准备: 准备一次实验所需要的酶标条，其他的可从微孔板上拆下，密封，按照 说明书要求保存，以备下次使用；
2.加样:实验操作中需使用一次性吸头，避免交叉污染。加样时不要有气泡， 将样品加于酶标板底
部， 尽量不触及孔壁， 轻轻晃动混匀， 加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时
间间隔如果太大，会导致不同的反应时间，影响到测量值的准确性及重复性。因此， 一次加样时
间（包括标准品及所以样品）最好控制在 5 分钟内；
3.温育: 为防止样品蒸发，实验时请将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内，以避免液体蒸发，洗板
后应尽快进行下一步操作，避免酶标板处于干燥状态，同时应严格遵守温育时间和温度；
4.洗涤: 充分的洗涤非常重要，在每次洗涤过程中，都要将洗涤液完全甩干。洗涤过程中反应孔中
残留的洗涤液应在滤纸上空干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要保证板底不应有残留液体、
指印及污渍等，避免影响酶标仪读数；
5.反应时间的控制: 加入显色液后需定时观察反应孔的颜色变化，如颜色较深，请提前加入终止液
终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数；
6.底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。

结果分析

推荐使用专业制作曲线软件进行分析， 如 curve expert 1.30, 根据样品 O.D.值，由标准曲线查
出相应的浓度，再乘以相应稀释倍数（没有稀释不需要乘），即为样品实际浓度。各标准品及样本
O.D.值扣除空白孔 O.D.值后作图（5 点图），如设重复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度
为纵坐标（或对数坐标），O.D.值为横坐标（或对数坐标），绘出标准曲线（最佳方程式应依回归
方程计算的 R2 值来定，以 R2 值越趋近于 1 为好）。

警告
本试剂盒中终止液具有轻微腐蚀性，使用时应避免接触衣物或眼、手等皮肤暴露部位。