产品基本信息

产品名称	Applied Cell®人成纤维细胞无血清培养基
货 号	AC-1001015
规 格	500mL
运输保存条件	基础培养基 2-8℃，添加剂-20--80℃
使用范围	人真皮/肺/心脏等多种组织器官来源成纤维细胞培养
保质期	12 个月

产品简介

人成纤维细胞无血清培养基是埃泽思生物科技有限公司（Applied Cell®）自主研发的一款适用于
人成纤维细胞培养的无动物源细胞培养产品。本产品应用人真皮、肺、心脏等多种组织器官来源成纤维
细胞原代分离、扩增与传代培养，且不含动物血清，内毒素水平低于药典标准（<0.06EU/mL）。本产
品生产过程遵循 ISO9001 体系,并符合 GMP 指导原则。

产品特性

 无外源动物蛋白成分，大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。
 全程无血清生产，极大降低批次间差异。
 可用于原代分离。
 内毒素<0.06EU/ml，远低于中国药典水平

产品内容

实验准备

人成纤维细胞培养基配制

1.1. 37℃快速解冻人成纤维细胞培养基添加剂，快速溶解时不易破坏添加剂中营养物质，时间大致为
10min。待添加剂融化后摇匀，分装或直接按比例添加到基础培养基中，分装后添加剂立即储存
于-20℃至-80℃，避免反复冻融。
1.2. 将添加剂以 10%比例加入到人成纤维细胞基础培养基中，混匀，即为人成纤维细胞无血清培养基
（AC-1001015）。混合后培养基可在 2-8℃ 稳定储存 2-3 周，不建议使用已配制超过 3 周的培养基。
1.3. 人成纤维细胞无血清培养基可直接应用于人真皮、肺、心脏等多种组织器官来源的成纤维细胞的
原代分离、扩增与传代培养。

操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作)

人成纤维细胞复苏(10cm dish)

1.1. 从液氮或-80℃冰箱中取出冻存的人成纤维细胞，迅速放入 37℃水浴快速融解。
1.2. 在生物安全柜或超净台中，将解冻后的细胞悬液缓慢加入 5 mL 预温的人成纤维细胞无血清培养
基（AC-1001015）。
1.3. 1200rpm 离心 3 min，吸掉上清，加入 10ml 人成纤维细胞无血清培养基重悬细胞。
1.4. 将细胞均匀铺到培养皿中，水平十字振动培养皿使细胞均匀分布，5% CO₂的 37℃恒温细胞培养
箱中培养 24 小时后观察细胞状态。
1.5. 24h 后更换新鲜人成纤维细胞无血清培养基继续培养，每 2-3 天更换培养液。

人成纤维细胞传代培养

2.1. 在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到 90%，即可传代。
2.2. 在超净台/安全柜中，吸掉原有培养基，加入 PBS 溶液清洗一次，加入细胞消化液（AC-1001024）
使之完全覆盖皿/瓶底。
2.3. 室温孵育 4-5 分钟或 37℃孵育 2-4 分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
2.4. 加入消化液 2 倍体积的人成纤维细胞培养基，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻
轻吹打混匀，使细胞完全分散。

2.5. 将细胞悬液转移到 15 mL 离心管中，1200 rpm 离心 3 min。
2.6. 弃上清，加入人成纤维细胞无血清培养基，重悬细胞，计数。1：2-1：4 比例传代，或按 2-5x10
4
cells/cm2 传代，均匀铺在培养皿/瓶中，置于 37℃，5%CO2 培养箱中培养。
注意：人成纤维增殖情况与细胞密度密切相关，所以传代时细胞密度不宜过稀。

人成纤维细胞冻存

3.1. 细胞达到 90%汇合度， 吸掉原有培养基，PBS 清洗一次。
3.2. 加入细胞消化液（AC-1001024）使之完全覆盖皿/瓶底，室温孵育 4-5min 或 37℃孵育 2-4min
分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
3.3. 加入消化液2倍体积的人成纤维细胞无血清培养基，用移液枪轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，
并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。
3.4. 将细胞悬液转移到 15 mL 离心管中，1200 rpm 离心 3 min，吸掉上清。
3.5. 加入适量无血清细胞冻存液（治疗级）（AC-1001006），调整细胞冻存密度在 1×10⁶ cells/mL
左右，每支冻存管分装 1.5-2ml。
3.6. 直接放入-80℃，24h 后转入液氮中长期保存。

质量控制