多肽纯度

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什么是多肽纯度？

多肽纯度通常通过反向高效液相色谱（RP-HPLC）测定，指在吸收光波长在220nm（肽键吸收最大波长）下目标多肽相对于杂质的占比。杂质一般包含在多肽合成过程中的一些残肽。多肽纯度是影响实验结果的重要因素，特别是纯度低于80%时，批次间稳定性会逐渐降低。

为什么选择高纯度？

不同应用中的多肽纯度推荐

国肽生物提供高质量多肽，纯度范围从粗品到高达>98%，并100%保证多肽最大量交付，助力您在多肽药物开发、疫苗制备等领域的研究。

合适的多肽纯度是实验的成功的关键因素。一般来说,肽纯度级别越高,实验结果越可靠。低纯度的多肽可能由于杂质残留而导致毒性或不必要的副反应，尤其是对于某些应用，如动物研究，高纯度多肽是必需的。但是考虑到预算,国肽生物为您推荐各应用中最低可接受的纯度：

什么是多肽的纯度？

多肽的纯度是指HPLC方法在214nm处检测到的目标多肽的含量(214nm是肽链的吸收波长)，紫外分光光度计检测不到水和残留的盐不。可发现其他的杂质包括：缺失序列（缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列），截断序列（加帽过程中产生的序列）脱保护不完全序列（产生于整个合成过程或最后的裂解过程）。

多肽纯化不涉及水和盐。HPLC纯化会产生少量的TFA，如：游离的氨基末端和其他侧链如Arg、Lys、His都可生成少量TFA杂质。通常交付的多肽多含有微量TFA和残留水。即使处于冻干状态，水也会因共价结合的能力不同而不同程度地存在着。

在多肽中还存在哪些其他物质(杂质)?

纯化前的多肽中包含的杂质包括多肽和非多肽物质, 纯化后的多肽中包含的杂质除了TFA盐，大多数为序列被修改的多肽。

缺失了一个或多个氨基酸残基的靶序列

为避免缺失序列的产生而进行的加帽操作，截断序列即产生于加帽过程中

产生于整个合成过程或最后的裂解过程

保护基重新附着在多肽的其他位置

纯度分析

多肽的纯度分析，一般都采用HPLC进行分析，选择RP-C18，粒径5μm，孔径300A，4.6×150mm，流动相：A，0.1% TFA/H2O；B，0.1% TFA/ACN，洗脱梯度，5%B--65%B，时间30min。也有些多肽，特别是短肽，由于亲水性强，在C18上保留很弱，需要改变条件，这里主要有两种方法：一个改变分析梯度，可以将起始梯度改为2%，等度或小梯度洗脱；另外一个方法是在流动相中加入强离子对试剂，如七氟丁酸，十八烷基磺酸钠等。

多肽是如何纯化的?

多肽纯化一般使用反相柱(如C8，C18等)，214nm。缓冲体系通常为含TFA的溶剂，pH 2.0 。Buffer A为含0.1%TFA in ddH2O，Buffer B为1%TFA/ACN/ pH 2.0。纯化前用Buffer A溶解；如果溶解不好，用Buffer B溶解后，然后用Buffer A稀释；对疏水性强的多肽，有时还需要加入少量的Formic Acid或醋酸。HPLC分析多肽粗产物，如果多肽不长(15aa以下)，一般会有主峰，主峰通常为全长产物；对于20aa以上的长肽，如果没有主峰，HPLC需搭配Mass来判定分子量，进而确定哪个峰是所要合成的多肽

肽的纯度能达到多少？我的实验需要多少纯度？

国肽生物可以提供不同的纯度级别供客户选择，从粗品到>98%纯度。根据客户需要我们可以提供纯度>98%的超纯多肽。各种纯度及应用范围如下：>70%，用于免疫实验和不敏感的筛选实验>80%，用于免疫实验和不敏感的筛选实验>90%，用于SAR研究和生物检测>95%，用于NMR，晶体结构研究及生物检测>98%，用于NMR，晶体结构研究及敏感的生物检测

合成纯度：Crude,脱盐，70%, 75%, 80%,85%, 90%, 95%，98%，99%

多肽产物纯度选择

　　常见的质谱级多肽纯度，一般要求>95%

　　用于抗体筛选纯度，一般>85%即可

　　NMR和结晶试验中，纯度一般>98%

　　粗品肽，一般>50%即可用于多肽筛选

　　多肽合成服务种类

　　多肽合成服务通常有线性肽合成服务、多种难肽合成服务、修饰肽合成服务、以及部分多肽合成公司还会提供多肽定制服务，定制出有针对性的合成肽。

　　目前有多肽合成公司提供的线性肽合成可达150个氨基酸，在修饰肽合成上，能提供常见修饰，磷酸化（Ser/Thr/Tyr），环化（酰胺环/二硫键环），荧光标记（5(6)-FAM，FITC，CY5，RhodamineB，PNA，EDNAS/dabcyl等），生物素标记（Biotin，Lys(Biotin)）/复合抗原（MAP）/含D型氨基酸,及各种氨基酸衍生物均可合成。